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氯磷酸鹽脂質體清除骨巨噬細胞的文獻匯總

巨噬細胞是一種多用途的細胞群，在清除局部組織中的細菌、將警報信號翻譯給其他免疫細胞、分泌細胞因子建立局部穩態免疫細胞網絡、參與T細胞在薄板內的再刺激和維持方面起著至關重要的作用。

氯膦酸鹽脂質體（Clodronate Liposomes）是目前*為成熟，*為經濟且*為理想的一種有效的巨噬細胞清除工具。脂質體包裹氯膦酸鹽通常用于清除巨噬細胞群，因為它一旦被巨噬細胞吞噬，被溶酶體酶消化，游離氯膦酸鹽在細胞質內積累，當濃度超過一定閾值時就會產生功能上不可逆的抑制和細胞凋亡。由于氯膦酸鹽在血液中的半衰期只有幾分鐘，游離的氯膦酸鹽會被腎臟迅速清除。借助腹腔，尾靜脈等多種給藥方式實現不同組織部位中巨噬細胞的清除。Clophosome®（氯氟松）是目前市場上*理想的用于體內/體外巨噬細胞清除的氯磷酸二鈉脂質體。

在大腦中，常駐小膠質細胞與血管周圍和腦膜巨噬細胞一起由胚胎卵黃囊前體產生，占所有腦細胞的10%。在這些研究中，氯膦酸鹽脂質體通過腦內或腦室注射給藥。小膠質細胞耗竭的不同效果可能是由于疾病模型、動物種類、動物年齡或氯膦酸鈉給藥劑量和時間的不同造成的。

以下是小編帶來的幾篇文獻整理，供大家參考。

文獻一

動物模型：C57BL/6J小鼠，使用海馬切片培養直接研究小膠質細胞

巨噬細胞清除脂質體：Combo Kit: Clophosome®, Clophosome®- A And Control Liposomes (Cat#F70101C-AC)

巨噬細胞清除方法：在體外試驗天數的第0天和第3天，在培養基中加入0.05 mg/mL Clophosome-A 培養24小時。對照組給予等量陰離子脂質體對照加入到培養基中。處理后，切片用加熱的PBS仔細沖洗三次，并用新鮮培養基培養。

巨噬細胞清除結果：

在氯膦酸處理的培養物中，小膠質細胞被顯著去除(圖A, 3)，而氯膦酸鈉對神經元密度無影響

參考文獻：Araki T, Ikegaya Y, Koyama R. Microglia attenuate the kainic acid-induced death of hippocampal neurons in slice cultures. Neuropsychopharmacol Rep. 2020;40(1):85-91. doi:10.1002/npr2.12086

文獻二

動物模型：C57BL/6J小鼠 

巨噬細胞清除脂質體：Clophosome® - Clodronate Liposomes (Neutral)（F70101C-N-2）

巨噬細胞清除方法：每只小鼠給藥70 μg，相當于10μL體積，如下圖所示，注射到左心室

巨噬細胞清除結果：

腦室內的氯膦酸鈉導致血管周圍CD206陽性巨噬細胞的清除，但不影響小膠質細胞(P2Y12R標記，綠色)。用內皮標記物番茄凝集素(藍色)觀察血管。

氯膦酸脂質體或PBS注射后血管周圍巨噬細胞數量的定量分析。

參考文獻：Császár E, Lénárt N, Cserép C, et al. Microglia modulate blood flow, neurovascular coupling, and hypoperfusion via purinergic actions. J Exp Med. 2022;219(3):e20211071. doi:10.1084/jem.20211071

文獻三

動物模型：C57BL/6雄性小鼠(8 ~ 10周齡，23 ~ 25 g)；C57BL/6背景Cx3cr1GFP/+小鼠(雄性，8 ~ 10周齡，23-25 g)

巨噬細胞清除脂質體：

Clophosome®-A - Clodronate Liposomes (Anionic)（Cat#F70101C-A)

DiI Fluorescent Control Liposomes for Clophosome® -A (Anionic) (2mL) (Cat#F70101F-A-2)

巨噬細胞清除方法：

Cx3cr1GFP/+小鼠和C57BL/6小鼠按先前報道的方法，將1 μL的Liposomes 或1 μL的對照Dil-Lip注射到左紋狀體(距囟門前方0.8毫米，外側2.0毫米，深度為3.0毫米)

巨噬細胞清除結果：

A.

注射Clodronate liposomes于24小時開始在腦實質中消耗小膠質細胞，注射1 μL Dil-Lip后第1天的一系列腦切片（脂質體用紅色熒光染料Dil標記）進入紋狀體（圖A第一排）或腦側室（圖A第二排）

代表性圖像顯示，紋狀體注射 Dil-Lip或Clodronate liposomes后不同時間點Cx3cr1-GFP+小膠質細胞（綠色）的耗竭。（圖A第三、四排）顯示放大后的小膠質細胞圖像。

B.

在Clodronate liposomes注射后的第1、4、7天，用流式細胞術分析Cx3cr1-GFP+小膠質細胞。圖中顯示了代表性的點圖，并顯示了紋狀體細胞群中Cx3cr1-GFP+的百分比。紅色：Cx3cr1-GFP?細胞群；綠色：Cx3cr1-GFP+細胞群（圖C）。

圖表顯示注射Clodronate liposomes后紋狀體和皮層中剩余Cx3cr1-GFP+種群的百分比（圖D）。

參考文獻：Han X, Li Q, Lan X, El-Mufti L, Ren H, Wang J. Microglial Depletion with Clodronate Liposomes Increases Proinflammatory Cytokine Levels, Induces Astrocyte Activation, and Damages Blood Vessel Integrity. Mol Neurobiol. 2019;56(9):6184-6196. doi:10.1007/s12035-019-1502-9

文獻四

動物模型：大鼠幼崽 (P9- P10)

巨噬細胞清除脂質體：

Combo Kit: Clophosome®, Clophosome®- A And Control Liposomes (Cat#F70101C-AC)

巨噬細胞清除方法：海馬切片培養中加入氯膦酸脂質體體外18天，濃度0.5 mg/mL（氯膦酸共500 μg），24小時后，用培養基輕輕洗滌培養物，并給予另一劑量的0.5 mg/mL氯膦酸脂質體，再孵育24小時，此時再次洗滌培養物，置于新培養基中，孵育7天。第7天，培養的小膠質細胞耗盡，準備進行后續實驗。

巨噬細胞清除結果：

小膠質細胞、星形膠質細胞、少突膠質細胞和神經元的代表性細胞特異性標記染色（Iba1，
GFAP, CNPase和NeuN）分別顯示與對照組（第一排）相比氯膦酸脂質體處理（第二排）的切片小膠質細胞耗竭，且對其他細胞類型沒有影響（比例尺，20毫米）。

參考文獻：

Pusic KM, Pusic AD, Kemme J, Kraig RP. Spreading depression requires microglia and is decreased by their M2a polarization from environmental enrichment. Glia. 2014;62(7):1176-1194. doi:10.1002/glia.22672